體外受精的卵母細胞收集
1.準備各種液體
(1)洗滌液2個30mm培養皿(Falcon 3001)或4個孔的培養(Nuncon:),加入0.8~2ml 10%血清Eade’s培養液。
(2)受*(insemination medium,IM) 4孔:Nunclon培養皿中每孔加入0.8ml或制成數個10%d的10%血清Earle’s液於(falcon 3002)平皿中微滴,表面用石蠟油覆蓋。
(3)生長液(growth medium,GM) 與受*同樣配制。各種培養液制備完成後,都應放入5%c02,370C培養箱內平衡,以保證pH及滲透壓穩定。
2.收集卵母細胞
(1)用10ml試管(Falcon 2001)收集卵細胞迅速將卵泡液倒入培養皿內(I~alcon3003),置實體解剖鏡下(15×),先用肉眼觀察可看到一個灰色透亮的粘液團塊,被稱為卵一冠一丘復合物(OCCC:),再在解剖鏡下觀察,確認是否有卵母細胞存在。
(2)根據OCCC的形態學如顆粒細胞大小及分散度等判斷卵細胞成熟度。
O級:無卵丘結構,可見放射冠或第一極體。
工級:很薄的卵丘和(或)放射冠圍繞在透明帶周圍,見第一極體
Ⅱ級:中等大小的卵丘結構,細胞松散,放射冠界限清晰。
Ⅲ級:卵丘結構大而松散,放射冠薄分界不清。
(3)將收集到的卵一冠一丘復合體OCCC放入洗滌液內,沖洗兩次,去除周圍的紅細胞,並轉移至IM液中,置5%C02及370C培養箱內培養4~6小時,使卵母細胞進一步成熟。
上一篇文章:體外受精的精液處理
下一篇文章:卵巢過度刺激反應的預防措施