1．準備各種液體

　　(1)洗滌液2個30mm培養皿(Falcon 3001)或4個孔的培養(Nuncon：)，加入0．8～2ml 10％血清Eade’s培養液。

　　(2)受*(insemination medium，IM) 4孔：Nunclon培養皿中每孔加入0．8ml或制成數個10％d的10％血清Earle’s液於(falcon 3002)平皿中微滴，表面用石蠟油覆蓋。

　　(3)生長液(growth medium，GM) 與受*同樣配制。各種培養液制備完成後，都應放入5％c02，370C培養箱內平衡，以保證pH及滲透壓穩定。

　　2．收集卵母細胞

　　(1)用10ml試管(Falcon 2001)收集卵細胞迅速將卵泡液倒入培養皿內(I~alcon3003)，置實體解剖鏡下(15×)，先用肉眼觀察可看到一個灰色透亮的粘液團塊，被稱為卵一冠一丘復合物(OCCC：)，再在解剖鏡下觀察，確認是否有卵母細胞存在。

　　(2)根據OCCC的形態學如顆粒細胞大小及分散度等判斷卵細胞成熟度。

　　O級：無卵丘結構，可見放射冠或第一極體。

　　工級：很薄的卵丘和(或)放射冠圍繞在透明帶周圍，見第一極體

　　Ⅱ級：中等大小的卵丘結構，細胞松散，放射冠界限清晰。

　　Ⅲ級：卵丘結構大而松散，放射冠薄分界不清。

　　(3)將收集到的卵一冠一丘復合體OCCC放入洗滌液內，沖洗兩次，去除周圍的紅細胞，並轉移至IM液中，置5％C02及370C培養箱內培養4～6小時，使卵母細胞進一步成熟。